РАЗРАБОТКА КОНТРОЛЬНЫХ МАТЕРИАЛОВ ДЛЯ СЕРОДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА

Ротанов С.В., Фриго Н.В., Полетаева О.А.

ФГУ «ГНЦД Минздравсоцразвития России», Москва

Контроль качества клинических диагностических исследований осуществляют с использованием сертифицированных контрольных материалов (КМ). Для контроля серологических исследований на сифилис в Российской Федерации разрешена к применению экспертная панель «ЭП СИФИЛИС», состоящая из четырех контрольных сывороток. Однако для целей внешнего контроля качества необходимо использовать КМ, характеризующиеся бóльшим разнообразием аттестационных параметров и длительным сроком годности.

Цель исследования: разработка стабильных КМ на основе сыворотки крови человека и различных видов консервирующих реагентов.

Материалы и методы. Из образцов крови 10 больных сифилисом и здоровых лиц были приготовлены КМ, путем внесения консервирующих и стабилизирующих добавок (борная кислота [1], диметилсульфоксид [2], ЭДТА [3], метилмертиолят [4], Proclin-300 [5] или азид натрия [6]) и последующей стерилизующей фильтрации через набор мембран с величиной пор 0,45-0,22 μм; контролем являлась сыворотка крови без консервантов, подвергнутая стерилизующей фильтрации [7]. Изучение активности специфических антител проводили в ИФА и РПГА (качественное и полуколичественное исследование) с интервалом 2 недели в течение 4-х месяцев хранения КМ при различных температурных условиях.

Результаты работы. Только замораживание КМ (при минус 18-20оС или 75-80оС) обеспечивало сохранение исходной активности специфических антител [регенты 3, 4, 6] или незначительное ее снижение - на 1-4% [реагенты 1, 2, 5 и без них - 7]. При хранении КМ в охлажденном состоянии (+4-8оС) в течение 120 дней было отмечено выраженное падение активности антител: до 68,2-70,3% от исходного уровня [с реагентами 4, 5 или 6] и до 39,9-57,4 % [с реагентами 1, 2, 3]. Внесение стабилизирующих добавок в КМ и последующее их хранение при комнатной температуре (+ 20-25оС) приводило к значительному снижению специфической активности антител (до 20-27% от исходного уровня).

Выводы. Проведенные исследования показали, что добавление к сыворотке крови каждого из изученных реагентов в отдельности не обеспечивало стабильной активности специфических антитрепонемных антител при температуре +4-8оС. Для получения стабильных КМ, сохраняемых при наиболее часто используемом температурном режиме (+4-8оС), необходима разработка более сложной рецептуры консервирующих добавок, включающей сочетанное использование реагентов.