Усовершенствованный набор реагентов «сифилис рпга-тест» для диагностики сифилиса и оценка его клинической эффективности

Марданлы С.Г.1, Ротанов С.В.2, Амелина Е.А.1

1 ЗАО «ЭКОлаб», г. Электрогорск; 2 ФГУ «ГНЦД Росмедтехнологий», г. Москва

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) при диагностике сифилитической инфекции зарекомендова­ла себя как тест, характеризующийся высокими показателями чувствительности и специфичности при иссле­довании сыворотки крови; применение этого метода для исследования ликвора еще не является регламентиро­ванным. Выпускаемые отечественными производителями наборы реагентов для РПГА нередко комплектуются компонентами, приобретаемыми у зарубежных производителей.

Цель. Разработка условий производства набора реагентов «Сифилис РПГА-тест» на основе отечественных сырьевых материалов и изучение клинической эффективности его применения при исследовании образцов сы­воротки крови и спинномозговой жидкости.

Материалы и методы. При разработке антигена для сенсибилизации куриных эритроцитов использовали лизат взвеси патогенных T. pallidum штамма Nichols, как содержащий весь спектр иммунодоминантных белков возбудителя сифилиса, и эритроциты цыплят-бройлеров. В состав буфера для разведения исследуемых образцов для снижения неспецифических результатов включены лизаты культуральных штаммов T. pallidum (Казань V, VII, VIII, IХ и Рейтера). При оценке качества набора реагентов «Сифилис РПГА-тест» были использованы: Международный стандарт ВОЗ (NIBSC, Великобритания), а также 413 образцов сыворотки крови и 44 про­бы спинномозговой жидкости, полученные от больных сифилисом (149 и 16 соответственно) и здоровых лиц (264 и 9), аттестованные по содержанию в них трепонемоспецифических антител в реакции иммунофлюорес­ценции, иммуноферментном анализе и РПГА.

Результаты. На предприятии ЗАО «ЭКОлаб» разработана технология производства компонентов набора ре­агентов «Сифилис РПГА-тест» на основе отечественных сырьевых материалов. Эритроциты цыплят-бройлеров обрабатывали растворами 3 % формальдегида (по методу Weinbach R., 1959) и 0, 005 % таниновой кислоты. Антиген получали путем разрушения микробных клеток патогенной T.pallidum штамма Nichols, выделенных из тестикулярной ткани зараженных лабораторных кроликов, с последующей очисткой продукта от балластных белков. Стандартизованы условия сорбции трепонемного антигена на танизированных эритроцитах, обеспечи­вающие длительное сохранение их специфической активности. Проведенные исследовании показали высокую чувствительность разработанного диагностикума по сравнению с аналогами на основе рекомбинантных анти­генов. Рекомендованное предварительное разведение испытуемых образцов сывороток крови для РПГА состав­ляло 1:20, ликвора — 1:5; для определения титра антител — серия последовательных 2-кратных разведений об­разцов в буферном растворе. Аналитическая чувствительность (пороговое определение трепонемных антител) с усовершенствованным набором реагентов «Сифилис РПГА-тест» составляла не менее 0, 05 МЕ/мл, что уста­новлено с использованием Международного стандарта ВОЗ. Приемочные технические и медицинские испыта­ния набора реагентов «Сифилис РПГА-тест» были осуществлены в ФГУ «ГНЦД Росмедтехнологий»; при этом установлены высокие показатели его клинической эффективности при исследовании сыворотки крови и лик­вора: чувствительность — 98, 1%, специфичность — 100% и воспроизводимость— 100%.

Заключение. На предприятии ЗАО «ЭКОлаб» (г. Электрогорск Московской обл.) разработан и произво­дится усовершенствованный набор реагентов «Сифилис РПГА-тест» для серодиагностики сифилиса на осно­ве отечественных сырьевых материалов (регистрационное удостоверение № ФСР 2010/08228 от 07.07.2010 г.).