Системы свободнорадикальногоокисления и антиоксидантной защиты как показатели пролиферативно-дифференцировочной активности кератиноцитов больных псориазом

Грашин Р.А., Барбинов В.В.

ВМедА, г. Санкт-Петербург

Цель: изучить влияние смесей липосомальных препаратов, наиболее активно подавляющих пролиферацию, на процессы свободнорадикального окисления (СРО) и антиоксидантной защиты (АЗ) в культурах кератиноцитов больных псориазом. Материалы и методы: для выделения первичных культур кератиноцитов использовались лоскуты кожи, взятые в стерильных условиях у больных псориазом из очага поражения. Хранение полученных клеток кожи производилось с участием среды ДМЕМ с 20% СЭКРС. Культивирование проводилось в стандартных условиях в 96-луночных планшетах и чашках Петри ∅ 40 мм. Пролиферативную активность клеток оценивали радиометрически по включению в кератиноциты меченых предшественников синтеза ДНК. Все эксперименты по определению пролиферативной активности проводили в 4 параллельных пробах. Часть клеток культур снималась на пике пролиферации, т.е. перед воздействием липосомальных смесей, вторая часть клеток изучалась после воздействия липосомальных смесей, т.е. после подавления пролиферации. Результаты исследований также сравнивались с контролем. В качестве контроля использовались кератиноциты, выращенные из кожных биоптатов не дерматологических больных.

Изучение показателей СРО и АЗ проводилось после воздействия липосомальных смесей, состоящих из: пентоксифиллина, пирроксана, натрия селенита (№1) — как наиболее подавляющей пролиферацию и пентоксифиллина и натрия селенита (№2) — как наименее активной в отношении пролиферативной деятельности, по результатам ранее проведённых нами исследований.

Смесь №1 легла в основу липосомального крема «Липсор».

Для изучения процессов свободнорадикального окисления и АО защиты использовались общепринятые биохимические методы. Определялись концентрации малонового диальдегида (МДА) диеновых коньюгат (ДК), восстановленного глутатиона (ВГ), сульфгидрильных групп белков (СГ), общей антиокислительной активности (ОАО), глутатионредуктазы (ГР), плутатион-пероксидазы(ГП), супероксиддисмутазы (СОД) и глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы (Гл-6ф-ДГ). Статистическая обработка результатов проводилась с использованием пакета прикладных программ Excel.

Результаты: ранее нами было отмечено, что активно пролиферирующие псориатические кератиноциты обладают высокой степенью антиокислительной активности. Это подтверждается как низкой концентрацией продуктов ПОЛ (ДК, МДА), так и вы-соким уровнем и активностью метаболитов и ферментов антиоксидантной защиты. После воздействия смесей липосомальных препаратов на активно пролиферирующие клетки отмечено резкое возрастание концентрации диеновых коньюгат в 3 раза (р<0,05) при применении смеси №1 и в 2,8 после внесения смеси № 2 (р<0,05) до более высоких цифр, чем в контроле. Концентрация МДА в первой группе наблюдений, где использована смесь № 1, также увеличилась более чем в 3 раза и даже достоверно превысила контрольные цифры. Применение смеси № 2 также привело к увеличению концентрации МДА, но только в 2,5 раза приведя её к уровню контрольных значений.

Концентрация СГ на пике пролиферации превышает контроль чуть более чем в 2 раза (р<0,05). После применения обеих смесей их уровень достоверно снижался. Концентрация ВГ при этом также снижалась и составила 1,87±0,24 и 6,73±0,92 моль/г ткани соответственно (по сравнению с 15,28±1,87 моль/г ткани до воздействия). Ферменты системы глутатиона претерпевают меньшие изменения, чем низкомолекулярные субстраты. Так, активность ГР на пике пролиферативной активности значимо не изменялась. Смесь с № 1 также достоверно не влияла на работу данного энзима, однако смесь № 2 достоверно снижала его активность по сравнению с периодом активной пролиферации. Изменения активности ГП выражены более заметно. Так, под влиянием комбинации № 1 активность этого фермента падала на 28%, а под действием смеси № 2 на 44%, приближаясь к данным контрольной группы. Напротив, активность СОД наибольшим образом изменялась под влиянием липосомальной комбинации № 1, где её активность уменьшилась на 30% и не отличалась от группы контроля. Под влиянием смеси № 2 значимых изменений в активности СОД не произошло. Активность каталазы достоверно снизилась под влиянием обеих комбинаций, на 75% и 69% соответственно.Несмотря на некоторые очевидные различия в действии обеих смесей препаратов, и первая и вторая комбинация достоверно снижают общую антиокислительную активность в культуре кератиноцитов, приводя её значения к данным контрольной группы. Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа снизила свою функциональную активность только в группе наблюдений, в которой использовалась смесь № 1 на 60%, став ниже контрольной.

Выводы: — изменение пролиферативной активности кератиноцитов коррелирует с изменением показателей про-и антиоксидантных систем кератиноцитов;

— липосомальные препараты, в наибольшей степени подавляющие пролиферацию в культуре кератиноцитов, вызывают параллельное снижение показателей антиоксидантной системы и увеличение концентраций продуктов липопероксидации;

— препараты, вызывающие увеличение интенсивности процессов СРО, могут рассматриваться как факторы, способствующие дифференцировке кератиноцитов при псориазе.