Природа антигенемии при микоплазменных инфекциях

Балабанов Д.Н.

ЦМСЧ №165 ФМБА РФ, ГУ НИИЭМ имени Гамалеи

В лаборатории микоплазм и L-форм бактерий впервые было показано, что как клинически здоровые люди, так и пациенты, страдающие НГУ, являются носителями антигенов при отрицательных результатах ПЦР и культурального метода.

При моделировании микоплазменной инфекции на экспериментальных животных антиген возбудителя сохранялся в крови и органах очень долго, как правило, на протяжении всего срока наблюдения (в течение нескольких месяцев) в различной форме: в виде корпускулярных антигенов на поверхности инфицированных клеток хозяина, в виде растворимых молекулярных соединений и в составе циркулирующих специфических иммунных комплексов.

При исследовании в иммуноблоте коллекции проб сывороток крови людей, имеющих в крови антигены M. hominis (Mh) и U. urealyticum (Uu) и не имеющих антител, отрицательных по ДНК и культуральному методу, был выявлен широкий спектр циркулирующих антигенов с молекулярной массой от 35 до 120 кДа.

Установлено, что ДНК и антигены Mh и Uu в сыворотке крови человека in vitro при 37 °С могут сохраняться длительное время.

Для этого в сыворотку крови человека, не имеющую ни антигенов микоплазм, ни антител к ним (предварительно проверив в РАГА и ИФА), вносили жизнеспособные клетки микоплазм и уреаплазм с известным титром. В других вариантах опыта вносили ДНК, выделенную из такого же количества бульонной культуры, и АГ с известным титром. Через определенные интервалы времени исследовали жизнеспособность внесенных клеток, сохранение их ДНК и антигенов. Установлено, что в этих условиях Mh выявляется на протяжении 7 суток в убывающем количестве, Uu в течение 24 часов. Их ДНК сохраняется очень долго: Uu — 1,5 месяца, Mh — 3 месяца. Антигены Mh 12-13 дней, Uu 3-4 дня. При внесении в сыворотку «чистой» ДНК и антигенов обнаружена та же закономерность: ДНК сохраняется на протяжении всего срока наблюдения, антигены — несколько дней.

В организме инфицированных животных внутриклеточная и внеклеточная ДНК может сохраняться минимум 2 месяца у кроликов, 2 недели у мышей. Инфекция носит генерализованный характер и при внутрибрюшинном заражении животных клетками микоплазм антигены и ДНК микоплазм обнаруживаются в сыворотке крови и во всех исследованных органах, в том числе костном мозге.

В следующем варианте опыта сыворотка крови и гомогенаты органов экспериментальных животных, положительных по ПЦР, были исследованы в ОТ-ПЦР, позволяющей выявлять коротко живущие, специфичные для каждого гена молекулы мРНК, наличие которой в клетке является показателем жизнеспособности бактерий. У кроликов реакция была положительной в сыворотке в 4 органах из 10 через 2 месяца после заражения. Через 4,5 месяца после заражения только в костном мозге, при отрицательных результатах посевов. У мышей ОТ-ПЦР оказалась положительной при исследовании тимуса только у одной мыши.

Культуральным методом из крови инфицированных людей и органов животных с трудом удалось выделить культуры, которые образуют на агаре нехарактерные очень мелкие светопреломляющие колонии. При фазово-контрастной микроскопии в них выявляются все характерные для микоплазм структуры.

Выводы:

ПЦР в качестве единственного метода не может быть использована для диагностики микоплазменных инфекций, особенно после антибиотикотерапии, поскольку в организме могут длительно сохраняться ДНК или фрагменты нежизнеспособных клеток.

При диагностическом исследовании проб сыворотки пациентов возможны ложноотрицательные результаты, т.к. проведенные исследования показали, что в сыворотке крови микоплазмы выявляются значительно реже, чем в УГТ. Кроме того, при исследовании проб сыворотки крови в ПЦР и получении положительных результатов они не всегда совпадают с данными ОТПЦР. Возможно, в ПЦР выявляется ДНК неживых клеток или ее фрагменты.

Культуральный метод не всегда является «золотым стандартом», особенно для M. hominis, т. к. культуры выделяются с большим трудом, только в начале инфекции.

Антитела выявляются только у 1/3-1/4 пациентов, имеющих антигены.

Для определения тактики ведения больного рекомендуется комплексное обследование с привлечением нескольких методов. Наиболее удачное сочетание, по нашим исследованиям: ПЦР + культуральный метод + РИФ. Выявление АТ класса М наряду с выявлением АГ может свидетельствовать о наличии свежей инфекции.