Опыт длительного культивирования и хранения trichomonas vaginalis in vitro

Махлай Н.С.

ФГУН НИИЭМ им. Пастера Роспотребнадзора

Trichomonas vaginalis вследствие особенностей метаболизма является труднокультивируемым простейшим, тем не менее культуральный метод по-прежнему остается «золотым стандартом» диагностики трихомониаза и напрямую зависит от качества используемых питательных сред. В связи с этим встает вопрос о контроле ро­стовых свойств среды, что является основной характеристикой ее качества. В НИИЭМ имени Пастера для се­рийного производства была разработана диагностическая питательная среда СВТ (№ ФСР 2009/05982).

Целью настоящей работы явилась отработка условий длительного хранения трихомонад для контроля ка­чества выпускаемых сред.

Материалы и методы. В работе использовали 10 клинических штаммов Trichomonas vaginalis, получен­ных из лаборатории иммунологии ФГУН НИИЭМ им. Пастера (г. Санкт-Петербург, РФ). Все культуры имели типичную для Trichomonas vaginalis морфологию, были активно подвижны. Все штаммы были положительны в ПЦР-РТ, проведенном с помощью тест-системы производства ИнтерЛабСервис (№ ФС 01262006/5190-06). Для длительного хранения штаммов Trichomonas vaginalis культуру, сконцентрированную на питательной сре­де до концентрации 108 кл/мл, вносили (0, 1 мл суспензии) в 0, 9 мл свежей питательной среды СВТ с добавле­нием различных концентраций глицерина, после чего пробы сразу замораживали при температуре минус 70 °С. Восстановление культур осуществляли путем 10-минутного помещения пробирок в термостат при температу­ре 37 °С.

Результаты. Известно, что Trichomonas vaginalis на питательной среде существует в грушевидной, оваль­ной и амастиготоной формах. Все испытуемые штаммы на 1–2-е сутки культивирования визуализировались преимущественно в виде грушевидной или округлой форм, имели жгутики и совершали характерные толч­кообразные движения. На третьи сутки наблюдалось максимальное накопление биомассы с наибольшим ко­личеством грушевидных форм, а на 4–5-е сутки культивирования трихомонады приобретали преимуществен­но малоподвижные и амастиготные формы с плохо различимым ядром и зернистой цитоплазмой. Однако при пересеве пятисуточной культуры на свежую питательную среду уже через 24 часа штамм восстанавливался и наблюдались только клетки с классической морфологией и подвижностью. При ПЦР исследовании была выявлена ДНК Trichomonas vaginalis на всех сроках культивирования независимо от морфологических из­менений на различных фазах жизненного цикла. После хранения в условиях низкой температуры в течение месяца все культуры восстанавливались, сохраняли свою морфологию, подвижность и способность размно­жаться in vitro.

Заключение. В результате работы была получена постоянная лабораторная коллекция из 10 культур Trichomonas vaginalis. Штаммы поддерживаются в питательной среде в концентрации 2×106кл/мл.