Обнаружение в материале урогенитального тракта человека последовательностей рибосомальных ДНК неизвестных видов эукариот, имеющих высокую генетическую гомологию с трихомонадами

Гущин А.Е., Рыжих П.Г., Маркелов М.Л., Неверов А.Д., Шипулин Г.А.

ФГУН «ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора», г. Москва

Введение: Использование культурально-независимого метода, основанного на филогенетическом анализе нуклеотидных последовательностей рибосомальных генов (рДНК) микроорганизмов позволило расширить представление о видовом разнообразии микробного сообщества урогенитального тракта и выявить новые виды бактерий, колонизирующих мочеполовые пути человека. Однако до последнего времени такой подход не использовался в изучении разнообразия эукариотических микроорганизмов, в частности трихомонад, при этом считается, что человек является хозяином только трех видов трихомонад, из которых один — Trichomonas vaginalis обитает в урогенитальном тракте и является возбудителем мочеполового трихомониаза.

Целью данного исследования стал филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей, выявляемых при амплификации с праймерами, специфическими к 18S- и 5.8S-рДНК представителей семейства Trichomonadidae, в материале из урогенитального тракта мужчин и женщин.

Материалы и методы: В качестве исследуемого материала использовали препараты ДНК, полученные из отделяемого цервикального канала и влагалища, а также отделяемого уретры мужчин. Всего было исследовано 285 образцов, полученных от пациентов как с клинической симптоматикой урогенитальной инфекции, так и от клинически здоровых лиц. Проводили ПЦРамплификацию с указанными выше праймерами, полученный продукт амплификации секвенировали, после чего проводили филогенетический анализ полученных последовательностей ДНК.

Результаты: Частота выявления последовательностей 18S- и/или 5.8S-рДНК оказалась достаточно высокой и составила в среднем 44% среди всех обследованных. Филогенетический анализ показал, что у 6 пациентов фрагменты рДНК имели 100%-ю гомологию с T.vaginalis. При этом у всех этих пациентов были положительными результаты ПЦР-исследования, проведенного с помощью коммерческой тест-системы к не-рибосомальным фрагментам генома T.vaginalis.

Филогенетический анализ остальных последовательностей рДНК показал, что среди различных видов простейших и грибов полученные нуклеотидные последовательности рДНК имеют наибольшую генетическую гомологию с трихомонадами птиц и животных. При этом обращает на себя внимание и выраженный генетический полиморфизм, свидетельствующий о видовом разнообразии неизвестных микроорганизмов. В недавно проведенных исследованиях материалов ротовой полости и бронхов пациентов пульмонологических отделений при цитологическом анализе были обнаружены микроорганизмы, морфологически сходные с трихомонадами, а филогенетический анализ амплифицированных фрагментов 5.8S-рДНК показал их высокую гомологию с Tetratrichominas gallinarium — трихомонадой птиц (Kutisova К et al., Parasitology 2005) и Trichomonas foetus — трихомонадой животных (Doboucher C., et al., JCM 2005).

Выводы: Полученные нами результаты свидетельствуют о наличии в материале урогенитального тракта человека последовательностей 18S-и 5.8S-рДНК-неизвестных видов эукариотических микроорганизмов, имеющих высокую генетическую гомологию с трихомонадами птиц и животных.