Количественный подход в выявлении условно-патогенных микробов, ассоциированных с дисбактериозом влагалища

Шипулина О.Ю., Насонова В.С., Шипулин Г.А.

ФГУН «Центральный НИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора, г. Москва

Цель: разработка методик количественного определения ДНК Lactobacillus sp., Gardnerella vaginalis, Ureaplasma sp., Mycoplasma sp. в отделяемом влагалища и оценка ассоциативной связи этих микроорганизмов с бактериальным вагинозом (БВ).

Материалы и методы: для количественного определения ДНК Lactobacillus sp. и Gardnerella vaginalis, а также Mycoplasma hominis, Ureaplasma sp. использовалась полимеразная цепная реакция с детекцией в реальном времени, на основе которой были разработаны тест-системы «Амплисенс Gardnerella vaginalis/Lactobacillus sp.-Титр-FRT», «АмплиСенс Ureaplasma sp.-Титр-FRT», «АмплиСенс Mycoplasma hominis-Титр-FRT». Количественное определение основано на использовании стандар-тных образцов с известной концентрацией ДНК выявляемых микроорганизмов. Результат выражали в геномных эквивалентах бактерий (ГЭ) на мл вагинального отделяемого (ВО) при условии стандартного забора материала (стандартный объем ВО в стандартном объеме транспортной среды). Также определяли коэффициент соотношения (КС) — разницу логарифма концен-трации Lactobacillus sp. и Gardnerella vaginalis.

Оценку аналитических характеристик разработанных методик проводили на клинических образцах от 25 женщин с диа-гнозом БВ и от 76 женщин без БВ (норма). Диагноз БВ был поставлен наосновании клинических критериев и подтвержден при микроскопическом исследовании мазка.

Результаты: данные, полученные в результате проведенных исследований, представлены в таблицах.

|Таблица 1. Средние концентрации ДНК Lactobacillus sp. и Gardnerella vaginalis в исследуемых группах

Группа Средняя концентрация (разброс значений) ДНК мик-

роорганизмов (lg копий ДНК/мл)

Число G.vaginalis+

(%)

Средний КС

(разброс)

Lactobacillus sp. Gardnerella vaginalis

БВ+ 4.8 (2.5-6.9) 8.5 (6.8-10.1) 100 -3.7 (-5.4 — -2.1)

БВ- 7.9 (6.1-10.2) 4.2 (2.5-6.6) 46 5.4 (2.2–9.9)

Таблица 2. Частота выявления и средние концентрации (lg копий ДНК/мл) Ureaplasma sp. и Mycoplasma hominis в исследуемых группах

Группа Ureaplasma sp. Mycoplasma hominis

Частота выявления (%) Средняя концентрация Частота выявления (%) Средняя концентрация

БВ+ 50.0 5.9 33.3 6.2

БВ- 52.9 5.5 23.5 2.3

Полученные данные свидетельствуют о высокой ассоциативной связи Gardnerella vaginalis с БВ. При использовании основных маркеров, определяемых в тесте «Амплисенс Gardnerella vaginalis/Lactobacillus sp.-Титр-FRT», можно с высокой эффективностью диагностировать БВ. Частота выявления Mycoplasma hominis в БВ-положительных и БВ-отрицательных образцах достоверно не отличалась, однако средняя концентрация ДНК Mycoplasma hominis в образцах с БВ была значительно выше. Частота выявления и средняя концентрация ДНК Ureaplasma sp. не отличалась в обеих группах.

Выводы: на основе ПЦР с детекцией в реальном времени нами была разработана тест-система для количественного выяв-ления ДНК Gardnerella vaginalis и Lactobacillus sp., которая с высокой эффективностью позволяет диагностировать бактериальный вагиноз. Использование методик количественного выявления ДНК Mycoplasma hominis и Ureaplasma sp. для диагностики БВ оказалось неэффективным.