Использование метода амплификации с вытеснением цепи (SDA; BD ProbeTec ET System) для диагностики ИППП среди осужденных

Ешимов А.Е., Хабижанов А.Б., Казыбаева Э.А.

ОКВД, г. Алматы, Казахстан

Цель: разработать алгоритм диагностики ИППП с использованием амплификации с вытеснением цепи в диагностике гонореи и урогенитального хламидиоза в условиях уголовно-исполнительной системы.

Материалы и методы: методика SDA основана на свойстве ДНК-полимеразы, лишенной экзонуклеазной активности, син-тезировать новую цепь ДНК, вытесняя рестрицированную цепь. Предварительно в ходе инициирования реакции с использо-ванием специальных праймеров создается сайт рестрикции для эндонуклеазы. Смещенные цепи связываются с индикаторной молекулой, содержащей флуоресцирующую и погашающую молекулы. Индикаторная молекула развертывается с помощью ДНК-полимеразы и разделяется рестрикционным энзимом. В результате пространственного разъединения наблюдается яв-ление флуоресценции. Исследования проводились на базе лаборатории Алматинского областного кожно-венерологического диспансера в течение 2006 - 2007 гг. В качестве биологического материала служили соскобы эпителиальных клеток мочеполовых путей, моча. Постановка реакции амплификации с вытеснением цепи (SDA — Strand Displacement Amplification) проводилась на комплексе лабораторного оборудования BD РrobeТec ET. Реактивы: комплект реактивов Chlamydia trachomatis (CT)/Neisseria gonorrhoeae (GC) BD РrobeТec ET; комплект контроля BD РrobeТec ET (CT/GC) — позитивный и негативный; разбавитель РrobeТec ET (CT/GC).

Результаты: составленный алгоритм постановки реакции был следующим: реактивы УЗЦ просушивали в двух отдельных

одноразовых микроотсековых полосах; обработанные лизированные образцы биоматериала добавляли в прайминговый микро-

отсек, содержащий праймеры усиления, флуоресцентно-меченную детекторную пробу; после инкубирования реакционную смесь

помещали в микроотсек усиления, содержащий ферменты — ДНК-полимеразу и рестрикционную эндонуклеазу; микроотсеки герметизировали и инкубировали в термически контролируемом флуоресцентном считывающем устройстве. Присутствие или отсутствие CT и GC, определяли по методу, отличному от ускорения BD РrobeТec ET для образца к предварительно опреде-ленным предельным значениям. При исследовании 572 образцов биоматериала получены положительные результаты на вы-явление ДНК Chlamydia trachomatis в 26 (4,5±4,1%), Neisseria gonorrhoeae — в 9 (1,6±4,2%) случаях. Объективность результатов подтверждалась соответствующими данными положительных и отрицательных контролей BD РrobeТec ET (CT/GC). Выводы: применение метода диагностики амплификации с вытеснением цепи с использованием системы BD РrobeТec ET может быть рекомендовано для обследования на гонококковую и хламидийную инфекции. Метод SDA дает следующие пре-имущества: повышение чувствительности и применимость к множеству видов образцов. Кроме того, в отличие от других моле-кулярно-генетических методов диагностики амплификация с вытеснением цепи на лабораторном оборудовании BD РrobeТec ET автоматизирована, что сводит к минимуму риск контаминации. Все это дает возможность использовать данный метод в условиях пенитенциарной системы.