Состояние процессов свободнорадикального окисления в культурах кератиноцитов больных псориазом

Грашин Р.А., Барбинов В.В.

ВМедА, г. Санкт-Петербург

Цель: изучить процессы свободнорадикального окисления (СРО) и антиоксидантной защиты (АЗ) как показатели пролиферативно-дифференцировочной активности клеток кожи при псориазе.

Материалы и методы: для выделения первичной культуры кератиноцитов использовались лоскуты кожи, взятые в стерильных условиях у больных псориазом из очага поражения. Хранение полученных клеток кожи производилось с участием среды ДМЕМ с 20% СЭКРС. Культивирование проводилось в стандартных условиях в 96-луночных планшетах и чашках Петри ∅ 40 мм. Пролиферативную активность клеток оценивали радиометрически по включению в кератиноциты меченых предшественников синтеза ДНК. Все эксперименты по определению пролиферативной активности проводили в 4 параллельных пробах. В качестве контроля использовались кератиноциты, выращенные из кожных биоптатов недерматологических больных. Для исследования процессов СРО и АЗ защиты использовались общепринятые биохимические методы. Определялись кон-центрации малонового диальдегида (МДА) диеновых коньюгат (ДК), восстановленного глутатиона (ВГ), сульфгидрильных групп белков (СГ), общей антиокислительной активности (ОАО), глутатионредуктазы (ГР), плутатионпероксидазы (ГП), супероксид-дисмутазы (СОД) и глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы (Гл-6ф-ДГ). Для статистической обработки результатов использовался пакет прикладных программ Excel.

Результаты: во всех пробах было отмечено резкое угнетение активности прооксидантной системы, о чём свидетельствует уменьшение концентраций диеновых коньюгат и малонового диальдегида. На пике пролиферации они уменьшены по сравнению с нормой более чем в 2 раза. При этом все показатели, характеризующие антиоксидантную систему в этот период, повышены, причём это касается как ферментов антиоксидантной защиты, так и субстратов. Так, концентрации ВГ и сульфгидрильных групп белков увеличены в 3,2 (р<0,05) и в 3,3 раза (р<0,05) соответственно.

Активность ферментов, обеспечивающих функционирование систем антиоксидантной защиты, возросла. Так, ГР показала достоверное увеличение на 25%, а глутатионпероксидаза на 67%. Ферменты, принимающие участие в дисмутации активных форм кислорода и перекиси водорода, подверглись менее значительным изменениям. Цитоплазматическая СОД кератиноцитов на пике пролиферации увеличила свою активность на 45%, а каталаза только на 21%. Уровень (ОАО) в период активной пролиферации как суммарный показатель оказался ожидаемо высоким. Он превышал контрольную норму практически в 2 раза (р<0,05). Особое внимание обращает на себя поведение глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, фермента пентозофосфатного цикла. Её активность на пике пролиферации оказалась выше на 54% по сравнению с кератиноцитами контрольной группы. Выводы: — активно пролиферирующие псориатические кератиноциты обладают высокой степенью антиокислительной активности, что подтверждается как низкой концентрацией продуктов ПОЛ (ДК, МДА), так и высоким уровнем и активностью метаболитов и ферментов антиоксидантной защиты;

- пролиферирующие кератиноциты обладают высокой метаболической активностью, что подтверждает высокая активность Гл-6ф-ДГ и других ферментов, а также накопление СГ белков;

- высокая степень АЗ и СГ белков свидетельствуют о смещении редокс-потенциала кератиноцитов больных псориазом в сторону восстановления, что характерно для активно пролиферирующих клеток.