Опыт применения ПЦР в реальном времени с гибридизационно-флуоресцентной детекцией для обнаружения Candida albicans в соскобах со слизистых оболочек урогенитального тракта

Кухарева Е.Н., Терман О.А., Фриго Н.В.

ФГУ ЦНИКВИ Росмедтехнологий, г. Москва

Цель: исследование диагностической эффективности метода полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с гибридизационно-флуоресцентной детекцией для обнаружения ДНК Candida albicans в клинических образцах. Материалы и методы: материалом для исследования служили соскобы со слизистых оболочек урогенитального тракта 50 пациенток с кандидозным вульвовагинитом, 54 пациенток с поражением слизистых оболочек урогенитального тракта неканди-дозной этиологии и клинически здоровых испытуемых. Исследования также проводили на 35 образцах, полученных из чистых культур грибов Candida albicans, Candida kefyr, Sacharomyces cerevisiae. Выделение ДНК из клинического материала и чистой культуры грибов проводили сорбентным методом (по методике Boom с соавт.). Для выявления ДНК Candida albicans методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с гибридизационно-флуоресцентной детекцией была использована тест-система «АмплиСенс Candida albicans — FL». В качестве подтверждающего теста использовали культуральный метод. Для посева Candida albicans применяли селективную питательную среду «Candi selekt» (BIO-RAD, France). Результаты: в ходе исследования клинических образцов пациенток опытной группы в 49 из 50 случаев отмечено совпадение результатов культурального и молекулярно-биологического методов. В 1 случае возбудитель не обнаруживался методом ПЦР при положительном результате культурального метода. Таким образом, чувствительность ПЦР при исследовании образцов клинического материала составила 98%. При анализе соскобов, взятых от 54 пациенток с поражением урогенитального тракта некандидозной этиологии и клиническиздоровых испытуемых, все 54 образца показали отрицательный результат, что указало на 100%-ную специфичность метода. При 3-кратном повторном исследовании 20 образцов биологического материала вос-производимость метода составила 94%.

При постановке ПЦР на 30 образцах, полученных из чистой культуры грибов Candida albicans, тест-система для проведе-ния ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией показала 100%-ную диагностическую чувствительность и 100%-ную специфичность.

Выводы: таким образом, при исследовании образцов клинического материала для выявления ДНК Candida albicans методом полимеразной цепной реакции в режиме рельного времени с гибридизационно-флуоресцентной детекцией с использованием тест-системы «АмплиСенс Candida albicans — FL» чувствительность метода составила 98 %, а специфичность — 100%.