О ВОЗМОЖНОСТИ ДИАГНОСТИКИ ТИПИЧНЫХ И АТИПИЧНЫХ ФОРМ ВЛАГАЛИЩНЫХ ТРИХОМОНАД ПРИ ПОМОЩИ МЕТОДОВ ЛЮМИНЕСЦЕНТНОГО АНАЛИЗА Морева Ж. Г., Алентьев А. Н. Ивановская государственная медицинская академия Ивановский государственный энергетический университет ВВЕДЕНИЕ. Принципы лабораторной диагностики мочеполового трихомониаза, направ­ленные на выявление типичной формы возбудителя, предусматривают достаточно полный алгоритм обследования пациентов с подозрением на трихомонадную инфекцию и включают микроскопический анализ нативных препаратов, анализ препаратов, окрашенных по Гра­му, метиленовым синим, по Романовскому — Гимзе, а также культуральное исследование. Однако идентификация трихомонад в клиническом материале затрудняется при наличии атипичных форм возбудителя. Выявление атипичных форм трихомонад, имеющих амебо­идную и округлую форму без выраженного ядра или с полиморфизмом ядер, окруженную оболочкой с выраженной зоной дифракционных колец, с отсутствием подвижности, в диа­гностических лабораториях при микроскопии зависит от квалификации врача­лаборанта. Культуральное выявление измененных форм возбудителя затруднено, так как, существуя в такой форме, трихомонады являются низко метаболитными и проявляют плохой рост даже на богатых питательных средах либо вообще не растут. Диагностическая ценность широко используемых в настоящее время методов детекции трихомонад, таких как ИФА и ПЦР, зависит от чувствительности тест­систем, используемых для проведения данного анализа. Альтернативными экспресс­методами для диагностики трихомониаза являются методы люминесцентного анализа, в частности реакция иммунофлюоресценции (РИФ) и метод спектрофлюориметрии. ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ — оценить возможности диагностики типичных и измененных форм трихомонад при помощи РИФ и метода спектрофлюориметрии. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ: способность различных форм трихомонад к люминесценции изу­чали путем постановки непрямой РИФ по стандартной методике, используя набор для флю­оресценции «ТрихоСкан» («ЛабДиагностика», Москва), в качестве флюоресцентной метки использовался флюоресцеинизотиоцианат (ФИТЦ), а также при помощи спектрофлюоримет­ра, используя метод синхронного сканирования флюоресценции. Исследование проводили на 35 штаммах Trichomonas vaginalis, взятых в концентрации 35 ´ 106 кл / мл, полученных от гинекологических больных путем культивирования клинического материала на питатель­ной среде Тераса. Культуры трихомонад в количестве 15 штаммов состояли из типичной грушевидной формы, хорошо подвижной с размером 10,8 ´ 15,2 мкм; 15 штаммов со­ставили атипичные формы, полученные из типичных клеток трихомонад в культуре путем добавления цитостатиков и препаратов — антиметаболитов циклофосфана, меркаптопурина, метотрексата в концентрации 500 мкг / мл; 5 штаммов, выделенных от больных, в культуре были атипичные. Атипичные клетки имели правильно округлую форму с размером 16,2 мкм, с ядром или двумя ядрами, встречались безъядерные формы с размером 27 мкм с толстой оболочкой, обладающей характерными оптическими свойствами, так называемые «блестя­щие» формы. РЕЗУЛЬТАТЫ. Просмотр мазков, полученных из клинического материала от больных женщин, и культур при постановке РИФ позволял наблюдать люминесценцию различных форм трихомонад. Типичные формы влагалищных трихомонад проявляли очень яркое, особенно по периферии клетки, светло­зеленое свечение, атипичные формы трихомонад светились в зеленой области спектра менее ярко и равномерно, а отдельные клетки трихо­монад проявляли ярко­оранжевую люминесценцию. Такой вид флюоресценции в соответс­твии с законом Стокса объясняется наличием совершенно иных биохимических свойств у атипичных форм трихомонад. В ходе эксперимента была исследована интенсивность флюоресцентного свечения, что отражено в спектрах флюоресценции, измерения были про­ведены в диапазоне длин волн (l) от 535 до 710 нм. Характерным для полученных спектров является наличие у некоторых штаммов 2 максимумов интенсивности флюоресцентного свечения в области зеленой и красной части спектра, резко выраженный максимум интен­сивности флюоресценции наблюдался в области длины волны l = 670 ± 5 нм. Полученные спектры показывают, что интенсивность флюоресцентного свечения типичных форм трихо­монад была в 2 – 3 раза выше интенсивности флюоресценции атипичных форм и составила в среднем I = 2,76 отн. ед., интервал интенсивности флюоресценции у типичных штаммов наблюдался от 2,3 до 3,5 отн. ед. Максимум интенсивности флюоресцентного свечения типичных трихомонад приходился в среднем в область длины волны l = 664,1 нм, интервал длин волн, при которых проявлялся максимум интенсивности флюоресценции, у различных типичных штаммов составил от 646 до 684 нм. Интенсивность флюоресцентного свечения атипичных форм трихомонад была ниже интенсивности флюоресценции типичных форм и составила в среднем I = 0,95 отн. ед., интервал интенсивности флюоресценции изменял­ся от 0,3 до 1,9 отн. ед. Максимум интенсивности флюоресцентного свечения атипичных трихомонад приходился в среднем в область длины волны l = 662,8 нм; интервал длин волн, в котором наблюдался максимум интенсивности флюоресценции, у различных атипичных штаммов составил от 650 нм до 670 нм. Максимумом интенсивности флюоресценции ФИТЦ наблюдался в области длины волны l = 670 нм, интенсивность флюоресценции ФИТЦ составила 1,5 отн. ед. Спектры флюоресценции отражают адсорбционные харак­теристики ФИТЦ к определенной форме трихомонады. Различие в интенсивности флюо­ресцентного свечения форм трихомонад можно объяснить различной степенью адсорб­ции флюорофора на поверхности типичных и измененных клеток возбудителя. Типичные трихомонады способны в большей степени адсорбировать на своей поверхности ФИТЦ, что проявляется в большей интенсивности флюоресценции. Атипичные формы трихомо­над имеют на своей поверхности другую антигенную структуру, вследствие этого слабо взаимодействуют с антителами, меченными флюорофором, что проявляется в меньшей интенсивности флюоресцентного свечения. ЗАКЛЮЧЕНИЕ. Экспериментально проведенные исследования указывают на сущест­венное различие в интенсивности флюоресцентного свечения типичных и атипичных форм T. vaginalis, что позволяет использовать данный признак для диагностики трихомониаза.