Новые рекомбинантные антигены: использование в серодиагностике сифилиса

Корогодин Д.В., Беневоленский С.В., Богуш П.Г., Редченко Е.Б., Алимбарова Л.М., Чиркова Е.Ю.

«Медико-диагностическая лаборатория», КВД № 1 Департамента здравоохранения, г. Москва

Цель: создать новые рекомбинантные белки, соответствующие антигенам Treponema pallidum, и разработать на их основе тест-системы для диагностики сифилиса (СФ).

Материалы и методы: рекомбинантные антигены Treponema pallidum — р15, р17, р45, р47 получали на основе генно-инженерной технологии с использованием дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Определение специфических антител к Treponema pallidum проводили в образцах сывороток крови, полученных от больных с различными формами СФ, с применением иммуноферментного анализа (ИФА) и реакции пассивной гемагглютинации (РПГА). Результаты ИФА учитывали спектрофотометрически.

Результаты: созданы новые рекомбинантные белки (НРБ), соответствующие антигенам Treponema pallidum с молекулярной массой 15 kDa, 17 kDa, 45 kDa и 47 kDa, признанным в качестве основных мишеней иммунного ответа на всех стадиях различных клинических форм СФ. Для этого впервые в качестве вектора использован ретротранспозон дрожжей Saccharomyces cerevisiae и созданы гибридные белки из матрикса и соответствующей антигенной детерминанты T.pallidum, которые легко очистить и концентрировать. Особая пространственная конфигурация позволяет значительно увеличить число активных сайтов связывания. Проведено сравнительное изучение активности рекомбинантных антигенов Treponema pallidum и их сорбционной емкости с нативными антигенами, а также отработаны условия их иммобилизации на поверхности полистироловых пластин.

На основе комбинации четырех НРБ создан диагностический набор — система иммуноферментная для выявления антител

классов IgG и IgM «Амеркард Анти-LUES». Чувствительность тест-системы оценивается как 100%, специфичность — 96,8-

99,2%, что соответствует наиболее известным зарубежным аналогам («Trepanostika», Organon; «ISE Syphilis», Murex Diagnostics),

а по чувствительности даже превосходит их. Создан экспериментальный вариант тест-системы для ИФА типа «ловушка» для выявления антител класса М. На основе НРБ разработаны экспериментальные варианты диагностикума эритроцитарного для РПГА (жидкие и лиофилизированные). Проведена сравнительная сенсибилизация эритроцитов барана, курицы и индюка. На основе оптимального варианта создана экспериментальная тест-система для РПГА. Анализ разработанных нами систем (ИФА и РПГА) показал схожесть результатов, однако тест-система для ИФА имела преимущества по показателям производительности и информативности.

Выводы:

1. Впервые для производства диагностических антигенов применена транспозонная модель гибридного белка.

2. Установлено, что применение рекомбинантных антигенов повышает результативность серологических методов исследования.

3. Продемонстрирована возможность создания на основе НРБ качественных, недорогих и безопасных для потребителя тест-систем (ИФА, РПГА) для различных уровней серодиагностики СФ.