Изучение полиморфизма RAGE-гена и его роли в предрасположенности к псориазу

Шульман А.Я., Терман О.А., Кухарева Е.Н., Акимов В.Г.

ФГУ ЦНИКВИ Росмедтехнологий, г. Москва

Цель: изучение ассоциации нуклеотидного полиморфизма RAGE-гена с предрасположенностью к псориазу в российской популяции для разработки комплекса мер первичной профилактики заболевания.

Материалы и методы: а) клинико-генеалогический: выявление патологических признаков с помощью клинического обследования, составление родословной, генеалогический анализ; б) лабораторные: полимеразнаяцепная реакция, рестрикционный анализ нуклеотидной последовательности ДНК, электрофорез в агарозном геле с целью детекции рестрикционных фрагментов ДНК, сорбентный метод выделения ДНК из лейкоцитов цельной крови (модификация Boom с соавт.) после предварительной отмывки лейкоцитов раствором Канкеля.

Условия проведения рестрикционного анализа: а) для сайта 2184A/G: рестриктаза (эндонуклеаза) BsmFI из Bacillus stearothermophilus F (New England Biolabs), инкубация продукта амплификации в течение 4 часов при 65 °С, инактивация фермента в течение 20 мин при 80 °С; б) для сайта G82S: рестриктаза (эндонуклеаза) Bacillus Alu I из Arthrobacter luteus (New England Biolabs), инкубация продукта амплификации в течение 4 часов при 37 °C, инактивация фермента в течение 20 мин при 65 °C; в) для сайта 1704G/T: рестриктаза (эндонуклеаза) BfaI из Bacteroides fragilis (New England Biolabs), инкубация продукта амплификации в течение 5 часов при 37 °C, инактивация фермента в течение 20 мин при 80 °C. Результаты: создан банк геномной ДНК человека, состоящий из 118 образцов. Сформированы группы испытуемых: больные псориазом (48 человек), их родственники (46 человек), группа контроля (здоровые добровольцы — 8 человек), группа сравнения (больные атопическим дерматитом — 9 человек, красным плоским лишаем — 4 человека, ихтиозом — 3 человека). Синтезированы праймеры к 3 мишеням в RAGE-гене, составлены тест-системы для проведения ПЦР, а также эмпирическим путем подобраны оптимальные профили амплификации, позволяющие накапливать максимальное количество продукта специфической реакции. В результате проведенного рестрикционного анализа длины фрагментов ДНК из 89 образцов гомозиготными по АА типу локуса RAGE2184 оказались 29 из группы больных псориазом и 47 в группе с отсутствием клинических признаков за-болевания. Частота встречаемости аллеля 2184G в группе больных псориазом была достоверно выше, чем в группе с отсутствием клинических признаков заболевания. Соотношение частоты встречаемости гомозиготных и гетерозиготных образцов в группе больных псориазом была ниже, чем в группе с отсутствием клинических признаков заболевания. Особенностями клинической картины обладателей генотипа GG локуса RAGE2184 являлось раннее начало заболевания, у 75% из них описана тяжелая форма псориаза. В 2 образцах выявлен мутантный генотип по сайту G82S, установлена связь данной мутациис нарушением толерантности к глюкозе. Ассоциации полиморфизма в участках гена RAGE1704 и 82 с проявлениями псориаза не установлено. Выводы: на основании полученных данных установлено, что важным фактором формирования предрасположенности к псориазу являются точечные нуклеотидные замены в локусе RAGE2184. Изучение нуклеотидного полиморфизма маркера RAGE2184 показало, что ассоциированной с псориазом является аллель G. Для выявленных лиц с генетической предрасположенностью разработаны рекомендации по первичной профилактике псориаза.