ИССЛЕДОВАНИЕ ДИНАМИКИ РЕЦЕПТОРОВ АПОПТОЗА НЕЙТРОФИЛОВ CD95+ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ДОНОРОВ ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ НИЗКОИНТЕНСИВНОГО ЛАЗЕРА С ПОСТОЯННОЙ И ПЕРЕМЕННОЙ ГЕНЕРАЦИЕЙ ИМПУЛЬСА Гизингер О. А., Летяева О. И. НИИ иммунологии ЧелГМА Росздрава, Консультативно­диагностический центр ЧелГМА, Челябинск ВВЕДЕНИЕ. Активация нейтрофильных гранулоцитов (НГ) при воспалении является неотъем­лемой частью почти всех форм воспаления. Многочисленные работы демонстрируют нару­шение процесса клеточной гибели при воспалении как в сторону активации, так и в сторону ингибирования. Наиболее «благоприятным» механизмом клеточной утилизации является апоптоз, так как внутриклеточные ферменты не выходят за пределы клетки и не оказывают повреждающего действия на окружающие ткани. Регулирование продолжительности жизни НГ путем апоптоза устанавливает тонкий баланс между их эффективным функционировани­ем в качестве одного из звеньев врожденного иммунитета и своевременным и безопасным удалением потенциально опасных клеток. Поскольку апоптоз может быть вызван экзогенны­ми факторами, к числу которых относится низкоинтенсивное лазерное излучение (НИЛИ), нами была изучена готовность к реализации апоптозной программы НГ, то есть запрограм­мированных внутриклеточных процессов, приводящих к гибели клетки по индукции CD95­ре­цепторов на НГ при их облучении НИЛИ с постоянной и переменной генерацией импульса. ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ — определение закономерностей и особенностей воздействия лазеров низкой интенсивности на процесс клеточной гибели НГ. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ. На взвесь нейтрофилов, выделенных из периферической крови 100 доноров воздействовали НИЛИ (доза излучения 1,1 Дж / см2, частота 100 Гц, время экспозиции 12,5 минуты, генерация излучения — импульсная или постоянная, количество проб интактных нейтрофилов — 80, количество проб нейтрофилов облученных лазером с постоянной генерацией импульса — 80, с переменной генерацией импульса­80). Про­цессы готовности НГ к апоптозу изучали с помощью люминесцентной микроскопии после окраски НГ этидий бромидом и акридиновым оранжевым. Для этого взвесь клеток с неакти­вированными и активированными нейтрофилами окрашивали этими красителями согласно методу, предложенному K. Gasiorowski и соавт. Учет результатов проводили с помощью люминесцентной микроскопии, по дифференцированному окрашиванию жизнеспособных, апоптозных и погибших клеток. У живых клеток цитоплазма и ядро окрашивались в зеленый цвет, у мертвых клеток — в красный цвет. Апоптозные клетки имели зеленую цитоплазму и сегментированное ядро, окрашенное в красно­оранжевый цвет. Сравнение уровня динамики рецепторов апоптоза нейтрофилов CD95+ периферичес­кой крови доноров после облучения лазером в импульсном режиме определенное методом иммунофлюоресцнеции, %. РЕЗУЛЬТАТЫ. Установлено, что импульсная генерация излучения обладает более выра­женным апоптогенным действием, чем излучение лазера с постоянной генерацией импульса. Достоверно значимые отличия при изучении апоптоза были получены при воздействии на нейтрофилы ЛО с переменным импульсом (достоверность отличий составила 0,003) с частотой 100 Гц, время облучения составило 12,5 минуты, доза облучения — 0,56 Дж/ см2. Нами был использован дополнительный метод определения способности НГ к апоптозу. Было изучено содержание поверхностных рецепторов апоптоза CD95+ на нейтрофилах донорской крови сразу после выделения, через 30 минут инкубации в термостате при тем­пературе 37 °С и после активации нейтрофилов НИЛИ с непрерывной и переменной подачей импульса. Данные проведенных опытов представлены в таблице. Установлено, что сразу после выделения нейтрофилов уровень CD95+­клеток составил 4,51% через 30 минут инкубации в термостате, доля апоптозных клеток значительно увеличилась до 15,88% и до­стоверно отличалась от уровня апоптоза нейтрофилов сразу после выделения (см. таблицу). Исследование действия лазера с непрерывной генерацией импульса показало, что данный вид воздействия приводит к усилению апоптотических потенций НГ. В процессе исследова­ния было обнаружено, что культивируемые нейтрофилы, не облученные НИЛИ, погибают медленнее, чем нейтрофилы, подвергшиеся воздействию лазера низкой интенсивности. Изменение частотного диапазона следования импульса приводит к более быстрой гибе­ли этих клеток по сравнению с контролем (р < 0,001). Полученные результаты позволяют предположить, что наблюдаемая достоверно значимая разница в эффективности действия лазеров с различной генерацией импульса может быть связана с различием в механизмах взаимодействия непрерывного и импульсного воздействия на иммунокомпетентные клетки. Проведенные исследования показали, что лазер с переменной генерацией импульса повы­шает способность клеток к апоптозу с большей эффективностью. ЗАКЛЮЧЕНИЕ. Направленная регуляция апоптоза нейтрофилов может рассматриваться как возможный терапевтический подход для коррекции ряда заболеваний, в том числе и ин­фекционно­воспалительных заболеваний урогенитального тракта, вызванных ИППП, пос­кольку некоторые из них, например хламидии, обладают выраженным антиапоптотическим действием, что позволяет им уклоняться от механизмов защиты макроорганизма.