Разработка нового набора реагентов для линейного иммуноблоттинга с целью диагностики сифилиса

Марданлы С.Г.1, Ротанов С.В.2, Амелина Е.А.1, Захаров М.В.1, Толстых Н.С.1, Арсеньева В.А.1

1 ЗАО «ЭКОлаб», г. Электрогорск, 2 ФГУ «ГНЦД Росмедтехнологий», г. Москва

В последние годы для диагностики сифилиса активно используют метод линейного иммуноблоттинга, ко­торый является одним из вариантов иммуноферментного анализа и позволяет в рамках одного исследования дифференцированно определять антитела к различным рекомбинантным антигенам бледной трепонемы; одна­ко в Российской Федерации до последнего времени не выпускалось отечественных наборов реагентов для это­го метода исследования.

Цель: разработка, изучение клинической эффективности и регистрация в Российской Федерации отече­ственного набора реагентов для линейного иммуноблоттинга с целью диагностики сифилитической инфекции.

Материалы и методы. Применен метод непрямого иммуноферментного анализа на твердой фазе: в каче­стве иммуносорбента — нитроцеллюлозные мембраны («PROTRAN», Германия), на которых в виде дискрет­ных линий иммобилизовали рекомбинантные химерные полипептиды ТрN15, TpN17, TpN47 и TmpA, анало­ги антигенов T. pallidum (ЗАО «ЭКОлаб», Россия); конъюгат — козьи антитела против IgG человека, меченные щелочной фосфатазой («Jackson Immuno Research Lab.» или «CHEMICON», Германия); субстрат — окрашива­ющий буфер «BCJP/NBT Ready-to-use-Substrate» («Kem in Tec», Дания). Для оценки показателей клинической эффективности разработанного набора реагентов использовали 219 образцов сыворотки крови и 48 проб лик­вора, полученных от больных сифилисом и здоровых лиц, аттестованных по содержанию в них трепонемоспе­цифических антител. Результаты. На предприятии ЗАО «ЭКОлаб» получен оригинальный иммуносорбент и определены опти­мальные условия проведения исследования с ним, что позволило разработать новый отечественный набор реа­гентов «Лайн-Блот Сифилис» для определения антитрепонемных антител методом линейного иммуноблоттин­га, который предназначен для использования в качестве подтверждающего теста при диагностике сифилиса. Изучение свойств разработанного набора реагентов, проведенное в испытательной лаборатории ЗАО «ЭКОлаб» с использованием аттестованных панелей контрольных материалов, сывороток крови и ликвора, показало 100% клиническую чувствительность, специфичность и воспроизводимость результатов исследований, что позволи­ло представить «Лайн-Блот Сифилис» для государственной регистрации в России в установленном порядке. Приемочные технические и медицинские испытания набора реагентов «Лайн-Блот Сифилис», осуществлен­ные в ФГУ «ГНЦД Росмедтехнологий», также показали его высокую диагностическую значимость: чувстви­тельность — 96, 4%, специфичность — 100% и воспроизводимость — 100%.

Заключение. Приказом Росздравнадзора № 1540-Пр/10 от 01.02.2010 г. набор реагентов «Лайн-Блот Сифилис» производства ЗАО «ЭКОлаб» (г. Электрогорск Московской обл.) был разрешен к производству, про­даже и применению на территории Российской Федерации; регистрационное удостоверение № ФСР 2010/06925 от 01.03.2010 г.