Разработка иммунофлюоресцентных диагностикумов для выявления антител классов g и m к trepоnema pallidum

Марданлы С.Г., Шершнева Н.Н.

ЗАО «ЭКОлаб», г. Электрогорск

Реакция иммунофлюоресценции в модификации РИФабс является на сегодняшний день одним из самых чувствительных методов для серодиагностики сифилиса и до сих пор не утратила свою значимость. Она была предложена в 1957 г. Deacon, Falcone и Harris. Неспецифические антитела удалялись из исследуемой сыворотки с помощью абсорбции разрушенными ультразвуком культуральными трепонемами, что существенно повышало специфичность данной реакции. РИФабс рекомендуется для ранней серодиагностики сифилиса, так как она становится положительной уже на третьей неделе после заражения, т.е. или за несколько дней до появления шанкра или одновременно с ним.

Цель. Разработка диагностикумов для выявления трепонемспецифических IgG и IgМ в реакции иммуноф­люоресценции в модификации РИФабс в клиническом материале, полученном от больных сифилисом.

Материалы и методы. В работе использовали инактивированный антиген, который представляет собой бледную трепонему штамма Никольса. Патогенные трепонемы культивировали в кроликах породы шиншилла. В качестве конъюгата использовали антивидовые антитела, меченные флюорохромом.

Для проверки чувствительности и специфичности разработанного диагностикума были проанализированы 144 пробы сыворотки крови больных сифилисом и 120 образцов, полученных от здоровых лиц, подтвержден­ные на наличие антител в иммуноферментном анализе (ИФА) и РПГА.

Результаты. На базе предприятия «ЭКОлаб» разработаны иммунофлюоресцентные диагностикумы для вы­явления трепонемспецифических IgG и IgМ.

Заражение кроликов проводили путем интратестикулярного введения взвеси бледных трепонем в дозе 1 мл в семенник. На 7–9-й день у кроликов развивался орхит. После подсчета бледных трепонем в выделенной суспен­зии, методом микроскопирования препарата в темном поле, наносили антиген на предметные стекла и проводи­ли фиксацию. Нами были подобраны оптимальные условия сенсибилизации антигена и постановки иммуноф­люоресцентного анализа. Для исключения неспецифических результатов использовали связывание групповых антител сорбентом — экстрактом из культуральных бледных трепонем (штаммы V, VII, VIII, VIX и Рейтера), об­работанных ультразвуком. Оптимальное разведение сывороток с ультрасорбентом составило 1:5. При исследо­вании 144 проб сыворотки крови больных сифилисом в РИФабс, ИФА и РПГА в 100% случаев в РИФабс, 99% в ИФА и 100% случаев в РПГА были обнаружены антитела классов G, М, G+М в 87%, 13% и 53% случаев со­ответственно. Обследовав всеми вышеуказанными методами 120 образцов, полученных от здоровых лиц анти­тел к Tr. pallidum выявлено не было. Для дополнительного подтверждения специфичности разработанных диа­гностикумов были исследованы 42 пробы сыворотки крови больных бореллиозом, и все они дали отрицатель­ный результат в РИФабс. Апробация на клиническом материале показала высокую чувствительность — 100 % и специфичность — 100 % разработанного диагностикума.

Заключение. На предприятии ЗАО «ЭКОлаб» (г. Электрогорск Московской обл.) разработаны и производятся иммунофлюоресцентные диагностикумы «Антипаллидум Флюороген IgG» и «Антипаллидум Флюороген IgМ» для серодиагностики сифилиса.