Исследование стабильности контрольных материалов, приготовленных из сыворотки крови человека

Ротанов С.В., Фриго Н.В., Полетаева О.А.

ФГУ «ГНЦД Минздравсоцразвития России», г. Москва

Цель исследования: Изучение стабильности контрольных материалов, приготовленных на основе сыворотки крови человека при добавлении различных видов консервирующих реагентов.

Применяемые методы и технологии: На основе 10 образцов сыворотки крови больных сифилисом и здоровых лиц были приготовлены контрольные материалы (КМ), разрабатываемые для проведения внешнего и внутрилабораторного контроля качества лабораторной диагностики сифилиса, путем внесения консервирующих и стабилизирующих добавок (борной кислоты [1], диметилсульфоксида [2], ЭДТА [3], метилмертиолята [4], Proclin-300 [5] или азида натрия [6]) и последующей стерилизующей фильтрации через набор мембран с величиной пор 0,22 μм; контролем являлась сыворотка крови без консервантов, подвергнутая стерилизующей фильтрации [7]. Для изучения стабильности КМ проводилось определение содержания трепонемоспецифических антител методами ИФА и РПГА (качественное и полуколичественное исследование) через каждые 10-14 дней хранения КМ в течение 4-х месяцев при различных температурных условиях.

Результаты работы: Установлено, что внесение в КМ стабилизирующих добавок и их последующее хранение при комнатной температуре (+ 20-25 оС) приводило к потере специфических активности КМ (до 20-27% от исходного уровня). При более низкой температуре хранения (+4-8 оС) динамика снижения уровня антител была менее выраженной; в КМ с консервирующими добавками 4, 5 или 6 через 120 дней хранения активность антител сохранялась на уровне 68,2-70,3% от исходного значения, другие консерванты (1, 2, 3) показали меньшую эффективность: сохранение 39,9-57,4% активности антител от исходного уровня.

Замораживание КМ с добавками 3, 4 и 6 в течение 120 дней при температуре минус 18-20оС сохраняло исходный уровень антител к бледной трепонеме; в КМ с добавками 1, 2 и 5 наблюдалось снижение уровня антител до 93%, 97% и 70% соответственно. При хранении КМ в течение 120 дней при температуре минус 80оС уровень антитрепонемных антител практически не изменялся и оставался в пределах 100% с добавками 3, 4, 6 и без добавок (7); при использовании добавок 1, 2 и 5 наблюдали незначительное снижение уровня антител — на 1-4 % от исходного значения.

Выводы: Проведенные исследования показали, что наиболее высокая стабильность КМ, предназначенных для проведения внутрилабораторного и внешнего контроля качества серологических исследований, применяемых при диагностике сифилитической инфекции, наблюдалась при их хранении в условиях низкой температуры (минус 18-20 оС и ниже). Вместе с тем, их хранение при более высокой температуре (+4-8 оС) не давало высокой стабильности уровня антител в КМ вне зависимости от добавления разных консервирующих добавок. Полученные данные позволяют заключить, что для получения стабильных КМ, сохраняемых при наиболее часто используемом температурном режиме (+4-8 оС), необходима разработка более сложной рецептуры консервирующих добавок, включающей сочетанное использование реагентов.